Cytoplazmatyczna nukleofosminina w ostrej białaczce szpikowej z normalnym kwasem ad

Takie zmiany w subkomórkowym rozkładzie białka fuzyjnego zawierającego NPM i NPM można wykryć metodami immunohistochemicznymi.12,17 W badaniu tym zidentyfikowaliśmy dużą podgrupę pacjentów z AML, którzy mieli cytoplazmatyczną NPM w blastach białaczkowych, zmutowany gen NPM, prawidłowy kariotyp i stosunkowo dobrą odpowiedź na chemioterapię indukcyjną.
Metody
Próbki nowotworowe
Badania immunohistochemiczne przeprowadzono na 1835 próbkach nowotworu zatopionych w parafinie od następujących pacjentów: 591 pacjentów (w wieku od 15 do 60 lat) z pierwotną AML inną niż podtyp FAB M3, którzy zostali zapisani do Włoch w Gruppo Italiano Malattie Ematologiche dell Adulto (GIMEMA) Leukemia Acuta Mieloide Protocollo rozpoczęta w 1999 r. (LAM99P) (316 pacjentów) lub w badaniach GIMEMA / Europejskiej Organizacji Badań i Leczenia Raka (GIMEMA / EORTC) AML12 (275 pacjentów) (szczegóły dostępne w National Auxiliary Publications Usługa [NAPS]); 129 pacjentów z pierwotną AML (w tym 70 z podtypem FAB M3) i 135 z wtórną AML, którzy nie byli uczestnikami badania GIMEMA (szczegóły dostępne z NAPS); i 980 z nowotworami krwiotwórczymi i zewnątrzhematopoetycznymi innymi niż AML. Próbki od 25 pacjentów z AML badano za pomocą immunohistochemii, zarówno w diagnozie, jak iw remisji.
Po uzyskaniu pisemnej świadomej zgody w każdym z uczestniczących ośrodków, próbka biopsji szpiku kostnego od każdego pacjenta została ustalona na 2,5 godziny w B5, przeniesiona do 70 procentowego roztworu alkoholu i dostarczona do Instytutu Hematologii na Uniwersytecie w Perugii, Perugia, Włochy. Próbki zostały odkamieniane i przetworzone w celu osadzenia parafiny.
Przeciwciała
Badania immunohistochemiczne przeprowadzono z użyciem przeciwciał monoklonalnych przeciw ALK i NPM, 5,11,12, w tym z dwoma nowymi przeciwciałami monoklonalnymi anty-NPM (klony 322 i 376), które dają silne barwienie w sekcjach parafiny. Inne stosowane przeciwciała monoklonalne to antyjądina (anty-C23) (Santa Cruz Biotechnology), antyiglikoporfina, anty-CD34 (DakoCytomation) i anty-CD133 (Miltenyi Biotec).
Barwienie immunohistochemiczne
Barwienie immunologiczne przeprowadzono przy użyciu techniki monoklonalnej fosfatazy zasadowej fosfatazy alkalicznej18 (szczegóły dostępne z NAPS). Podkomórkowy rozkład NPM (tj. Ograniczenie do jądra lub obecność w cytoplazmie) oceniano bez znajomości podtypu FAB, cech cytogenetycznych lub ustaleń molekularnych. Przypadki sklasyfikowano jako NPMc + (dodatni dla cytoplazmatycznego NPM) lub NPMc- (ujemny dla cytoplazmatycznego NPM). Wszystkie skrawki barwiono równolegle dla nukleoliny (C23), innego antygenu jąderkowego, który w przypadkach NPMc + musiał być ograniczony do jądra.
Analizy cytogenetyczne i molekularne
Badania cytogenetyczne przeprowadzono po krótkotrwałej hodowli. Kariotypy, analizowane po pasmowaniu G, zostały opisane zgodnie z Międzynarodowym Systemem Nomenklatury Człowieka Cytogenetycznego.19 Badania fluorescencji in situ w hybrydyzacji (FISH) przeprowadzono jak opisano wcześniej.20 Przeprowadzono również następujące analizy, jak opisano wcześniej: analiza reakcji łańcuchowej transkryptazy-polimerazy (RT-PCR) na białaczkę promielocytową (PML) -RAR., ostra białaczka szpikowa osiem osiemnaście (AML1-ETO), czynnik wiążący rdzeń łańcucha ciężkiego B-miozyny 11 (CBFB-MYH11 ), region z punktem przerwania, region V-Abl, mysi wirus białaczki jajecznej Abelson (BCR-ABL) i DEK-nukleoporyna 214 kD (DEK-CAN); Southern blotting i FISH w przypadku rearanżacji w genie białaczki mieszanej (MLL); i mutacyjna analiza genu kinazy tyrozynowej FMS (FLT3) i MLL.21-24
Mutacyjna analiza NPM
Tabela 1
[patrz też: hipogonadyzm, nfz sanatoria lista oczekujących gdańsk, guzki heberdena ]
[podobne: ciśnienie krwi normy, ciśnienie krwi tabela, ciśnienie skurczowe ]